一、己烯雌酚檢測(cè)試劑盒概要

己烯雌酚（Diethylstilbestrol，DES）是甾類(lèi)同化激素，被大量用于促進(jìn)反芻動(dòng)物的生長(zhǎng)。但由于己烯雌酚存在明顯的致癌性，歐美等發(fā)達(dá)國(guó)家已相繼禁止或嚴(yán)格禁止使用。我國(guó)農(nóng)業(yè)部第235號(hào)文件中規(guī)定，動(dòng)物源性食品中己烯雌酚的殘留xian量為不得檢出。

二、己烯雌酚檢測(cè)試劑盒原理

己烯雌酚試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法檢測(cè)尿樣、組織、飼料等樣本中的己烯雌酚，試劑盒由預(yù)包被偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板、酶標(biāo)記物、抗體、標(biāo)準(zhǔn)品及其他配套試劑組成。檢測(cè)時(shí)，加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品溶液，樣本中的己烯雌酚和酶標(biāo)板上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)抗己烯雌酚抗體，加入酶標(biāo)記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光度值與其所含己烯雌酚含量成負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)比較即可得出樣本中己烯雌酚的殘留量。

三、適用范圍

己烯雌酚試劑盒可定性、定量檢測(cè)動(dòng)物組織（肌肉、肝臟等）、尿液、飼料等樣品中己烯雌酚的殘留量。

四、 技術(shù)指標(biāo)

1 試劑盒靈敏度：0.1ppb(ng/ml)

2 反應(yīng)模式：37℃，30min～30min～15min。

3 檢測(cè)下限：

組織（蝦、魚(yú)）：0.2ppb

豬肉/肝、雞肉/肝：2ppb

飼料：……20ppb

尿液：……0.6ppb

4 交叉反應(yīng)率：

己烯雌酚：100%

雙烯雌酚：38.5%

己烷雌酚：8.5%

己炔雌二醇：<0.1%

雌三醇：…<0.1%

5 樣本回收率：

尿     樣   ： 70%±10%

組     織   ： 85%±10%

飼     料   ： 90%±10%

五試劑盒組成

酶標(biāo)板、標(biāo)準(zhǔn)品、高標(biāo)準(zhǔn)品、酶標(biāo)記物、抗體工作液、底物液A、底物液B、終止液、濃縮洗滌液、復(fù)溶液

六、貯藏條件及保存期

儲(chǔ)藏條件：試劑盒于2-8℃保存，不要冷凍。

保 質(zhì) 期：該產(chǎn)品有效期為1年，生產(chǎn)日期見(jiàn)包裝盒。

?酶聯(lián)免疫試驗(yàn)步驟

   將所需試劑從4℃冷藏環(huán)境中取出，置于室溫平衡30min以上, 洗滌液冷藏時(shí)可能會(huì)有結(jié)晶需恢復(fù)到室溫以充分溶解，每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數(shù)量的微孔板及框架，將不用的微孔板放入自封袋，保存于2-8℃。

1 編    號(hào)：將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。

2 加樣反應(yīng)：加標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)用液或樣本50μl/孔到各自的微孔中，然后加抗體工作液50μl/孔，輕輕振蕩5秒混勻，25℃避光反應(yīng)30分鐘。

3 洗    滌：小心揭開(kāi)蓋板膜，甩去孔內(nèi)液體，每孔加350ul工作洗滌液，靜置30秒后棄去，重復(fù)洗滌5次，一次拍干（用吸水紙拍干，拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。

4 加酶反應(yīng)：加酶標(biāo)記物100μl/孔，25℃避光反應(yīng)30分鐘。

5 洗    滌：同上

6 顯    色：加底物液A 50μl/孔，再加底物液B 50μl/孔，輕輕振蕩5秒混勻，25℃避光顯色15分鐘（若藍(lán)色過(guò)淺，可適當(dāng)延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間）。

7 終    止：加終止液50μl/孔，輕輕振蕩混勻，終止反應(yīng)。

8 測(cè)吸光值：用酶標(biāo)儀于450nm處測(cè)定每孔吸光度值（建議用雙波長(zhǎng)450/630nm）。測(cè)定應(yīng)在終止反應(yīng)后10分鐘內(nèi)完成。

結(jié)果分析

1 百分吸光率的計(jì)算

   標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光度值的平均值（雙孔）除以個(gè)標(biāo)準(zhǔn)液（0ppb）的吸光度值，再乘以100%，即

百分吸光度值（%）＝A×100%

A0

A—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值

A0—0ppb標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值

2 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的繪制與計(jì)算

   以標(biāo)準(zhǔn)液百分吸光率為縱坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)液濃度（ppb）的對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)液的半對(duì)數(shù)曲線(xiàn)圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)中，從標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)上讀出樣本所對(duì)應(yīng)的濃度，乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中待測(cè)物的實(shí)際濃度。